Pirógenos
Los pirógenos son sustancias capaces de provocar fiebre al ingresar en el sistema circulatorio sanguíneo. La fracción más relevante son las endotoxinas bacterianas, fragmentos lipopolisacáridos (LPS) liberados por la membrana externa de bacterias Gram-negativas tras lisis. Son extraordinariamente termoestables (resisten autoclave 121 °C × 20 min) y atraviesan la mayoría de los filtros bacterianos, por lo que requieren tratamiento específico. Su control en agua de proceso, soluciones inyectables y dispositivos médicos es crítico: el límite USP típico para Water for Injection (WFI) es 0,25 EU/ml.
La determinación de endotoxinas se realiza con el ensayo LAL (Limulus Amebocyte Lysate, basado en lisado de cangrejo herradura) en sus tres variantes: gel-clot (cualitativo), turbidimétrico cinético y cromogénico cinético. La industria está migrando al rFC (recombinant Factor C) para reducir el uso de animales, aceptado por USP . El control en proceso requiere sistemas de filtración especiales: ultrafiltración de corte 6.000-10.000 Da, columnas de afinidad con polimixina B, o destilación múltiple efecto. Las endotoxinas se acumulan en biofilms de tuberías y depósitos, por lo que CIP/SIP riguroso es prerrequisito de control.
USP Bacterial Endotoxins Test. USP Bacterial Endotoxins Test Using Recombinant Reagents. EP 2.6.14 European Pharmacopoeia. ISO 29701 para dispositivos médicos. EMA Annex 1 (2022). FDA Guidance for Industry — Pyrogen and Endotoxins Testing. ICH Q4B Annex 14. ISO 11737-3 para dispositivos médicos terminados.
Producción farmacéutica de inyectables, vacunas y biológicos: control de WFI y producto terminado. Industria de hemodiálisis: agua para baño dialítico (límite 0,25 EU/ml). Agua de inyección (WFI) y agua purificada de alta calidad. Bebidas y alimentos parenterales. Aguas para preparación de medicamentos. Cosmética inyectable. Bioprocesado de proteínas terapéuticas. Producción de gases medicinales.
Confundir esterilidad con apirogenicidad: un líquido puede ser estéril (sin microorganismos viables) y altamente pirógeno (con LPS de bacterias muertas). Tratar autoclave como suficiente: las endotoxinas resisten esterilización por calor húmedo. Usar filtros estériles 0,2 µm asumiendo retención de pirógenos: las moléculas LPS pasan a través. Despreciar contaminación post-CIP por biofilms: la limpieza inadecuada puede aumentar carga de LPS. Validar reducción solo con stock comercial sin verificar matriz de producto real.
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